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01論文摘要
硫胺素(維生素B1)及其活性形式——焦磷酸硫胺素(TPP)——是所有生物體中不可或缺的輔因子。然而,原核生物中工業化的硫胺素生產一直受到嚴格反饋調控機制的制約,例如由TPP核糖開關所介導的調控機制。本研究探索了裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)——該菌株天然缺乏TPP核糖開關——作為替代性生產宿主的可行性。我們鑒定出細胞外磷酸酶Pho1與Pho4為關鍵的冗余酶,它們通過水解單磷酸硫胺素來支持硫胺素營養缺陷型菌株的生長。通過刪除信號肽對Pho1和Pho4進行細胞內滯留工程改造后,增強了細胞內硫胺素的合成能力;這一效應體現在TPP對nmt1+基因的抑制作用得到強化。該改造有效降低了由可被硫胺素抑制的nmt1啟動子驅動的異源基因的滲漏性基礎表達水平,同時并未影響該啟動子的強誘導性,從而為S. pombe構建了一個優化的基因表達系統。本研究為硫胺素代謝機制提供了新的見解,并為優化真核生物表達系統提供了有效的工程化策略。

02新芝產品支持

Growth was monitored in a SCIENTZ (MGC-500) growth curve analyzer at 30?C for 72 h with continuous orbital shaking at 200 rpm, following a 10-s pre-shaking step.
在 30°C 條件下,使用 SCIENTZ( MGC -500) 微生物生長曲線分析儀對樣本進行 72 小時的生長監測,期間以 200 rpm 的轉速進行連續軌道振蕩,此前需進行 10 秒的預振蕩步驟。
在本研究中,裂殖酵母長達72小時的連續培養與實時監測,正是由新芝MGC-500微生物生長曲線分析儀全程承擔。MGC-500在200 rpm的連續軌道振蕩條件下穩定運行72小時,為研究人員提供了完整、可靠的酵母生長動態數據。該設備將微生物培養與生長曲線檢測合二為一,全過程無需人員值守、無需頻繁取樣、徹底杜絕污染風險,真正解放人力。研究人員只需設定好參數,即可在72小時內持續獲取生長曲線數據,大幅降低了長時間連續監測實驗的人力成本與污染風險。
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