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　　01論文摘要

　　產氣莢膜梭菌是一種普遍存在的食源性及人畜共患病原體，可引起人類及牲畜的壞死性腸炎、食物中毒及氣性壞疽，在某些亞型中致死率可達100%。青藏高原因其高海拔、低氧環境、劇烈的溫度波動及強烈的紫外線輻射而形成了強烈的自然選擇機制，驅動著具有高原特異性的微生物進化過程。我們從牦牛和藏豬中分離并測序了8株產氣莢膜梭菌，并將其與129個公開基因組進行比對分析。多位點序列分型（MLST）揭示了廣泛的遺傳異質性，共發現35個新等位基因和18種新序列型（STs），所有高原分離株均攜帶新等位基因或新序列型。毒素分型鑒定出6種毒素型，其中A型（43.0%）和F型（42.3%）占主導地位，其毒力基因譜與毒素型分類結果相符。共檢測到涵蓋8個藥物類別的16個抗菌藥物耐藥性（AMR）基因，其中萬古霉素類及防御素樣基因在>96.0%的分離株中存在；其中4個基因與可移動遺傳元件（MGEs）或IV型分泌系統（T4SS）相關。環境耐受性試驗表明，有3株高原分離株在厭氧條件下于pH 7.5時仍能生長，而所有分離株在pH 7.0時的生長均受到抑制。泛基因組關聯分析揭示了一個包含 146 個節點、3,390 條邊的網絡；其中 IS 家族轉座酶（ISCbt3/ISCpe4）、σ 因子（sigL 與 sigA）以及 DNA 聚合酶 I（polA）作為核心樞紐，可能參與介導細菌對脅迫環境的適應過程。對來自青藏高原的產氣莢膜梭菌進行的基因組流行病學分析表明，該菌群具有顯著的遺傳多樣性、廣泛的耐藥性、由毒素型定義的毒力特征以及適應高海拔環境的遺傳特征，這些發現為在高原生態系統中實施基于證據的防控措施提供了依據。

02新芝產品支持

Optical density at 630 nm (OD???) was recorded every 30 min using an automatedmicrobial growth curve analyzer (MGC-500, Ningbo Scientz Biotechnology Co., Ltd.,Ningbo, China), and the growth curve was plotted after the measurement was completed. Since pH 8.0 represented the optimal growth condition in this study, it was selected as the reference for statistical comparisons. Differences in growth between this optimum and the other pH levels (7.0 and 7.5) were analyzed using two-tailed paired t-tests(P < 0.05). Finally, potential genomic correlates of tolerance were evaluated by comparing quantitative gene counts (ARGs and MGEs) via unpaired t-tests and categorical toxinotype distributions via Fisher’s exact test.

　　使用自動化微生物生長曲線分析儀（MGC -500，寧波新芝生物科技股份有限公司，中國寧波）每30分鐘記錄一次630 nm處的光密度值（OD???），測量完成后繪制生長曲線。由于本研究中pH 8.0代表最佳生長條件，故將其作為統計學比較的參照值。該最佳pH值與其他pH水平（7.0和7.5）之間的生長差異采用雙尾配對t檢驗進行分析（P < 0.05）。最后，通過非配對t檢驗比較定量基因計數（ARGs與MGEs）以及通過Fisher精確檢驗分析分類毒素型分布，評估耐受性潛在的基因組相關性。

微生物生長曲線分析儀 MGC-500

　　本研究中，8株高原分離株在pH 7.0、7.5、8.0三種條件下的生長動力學監測，由新芝MGC-500全程承擔。MGC-500以每30分鐘一次的頻率自動記錄OD???值，全程無需人工取樣，為研究人員提供了完整、連續的生長曲線數據，大幅降低了連續監測實驗的人力成本與污染風險。值得一提的是，MGC-500搭載先進的氣路控制系統，支持O?和CO?雙控或單控，厭氧模式下配合鈀粒可有效去除環境中的氧氣并維持嚴格無氧狀態。本研究涉及的產氣莢膜梭菌為嚴格厭氧菌，MGC-500的厭氧環境控制能力為實驗的順利開展提供了關鍵保障